【產(chǎn)品編碼】210817/210818

【包裝規(guī)格】

【產(chǎn)品簡介】CellCounting Kit-8(簡稱CCK-8),是種基于WST-8面廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。CCK-8試劑中含有WST-8(化學名:2-(2-甲氣基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基茉基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2日-四唑單鈉鹽)是種類似于WTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩臻錯硫酸二甲酯(1-Wethoxy PMS)存在條件下,可以被線粒體內的股氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲珊產(chǎn)物Formazan(參考圖1),生成的Forazan數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這特性直接進行細胞增殖和毒性分析,細胞增殖越多越快,則顏色越深:細胞毒性越大，則顏色越淺。

【操作步驟】、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量)制備細胞懸液:細胞計數(shù)。K2.接種到96孔板中:按比例(例如:1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比釋成個細胞濃度梯度，般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個重復孔。每孔100L細胞懸液。3.37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng):細胞接種后貼大約要培養(yǎng)2-4小時,如果不要貼這步可以省去。4.每孔加入10HLCCK-8增強型溶液:由于每孔加入CCK-8量比較少,有可能因試劑沾在孔壁帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混,或者直接配制含10%CCK-8的培養(yǎng)基,以換液的形式加入。注意不要在孔中生成氣泡,以免彤響吸光摩的檢測5.培養(yǎng)箱內孵育定時間后測定450nm吸光度,制作出條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，吸光度為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以定出未知品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提是實驗的條件要致,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。
便捷程度
細胞活性檢測
1、制備細胞懸液:細胞計數(shù)。2.接種到96孔板中:根據(jù)合適的鋪板細胞數(shù),每孔100HL細胞懸液,可設置3個重復孔3.37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng):細胞接種后貼壁大約要培養(yǎng)24h小時,如果不要貼壁這步可以省去。也可以根據(jù)實驗要求的不同,培養(yǎng)相應的時間。4,每孔加入10HL CCK-8增強型溶液由于每孔加入CCK-8量比較少,有可能因試劑沾在孔壁帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混?；蛘咧苯优渲坪?0%CCK-8的培養(yǎng)基,以換液的形式加入，注意不要在孔中生成氣泡,以免影響吸光度的檢測。